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人可溶性腫瘤壞死因子α受體(sTNFαR)ELISA試劑盒實驗使用說明書
BS-0367人可溶性腫瘤壞死因子α受體(sTNFαR)ELISA試劑盒
一、實驗原理
采用雙抗體夾心法:
包被階段:微孔板預包被抗人sTNFαR單克隆抗體(固相抗體)。
結合階段:樣本中sTNFαR抗原與固相抗體結合,后加入生物素標記的二抗形成“抗體-抗原-酶標抗體"復合物。
顯色階段:TMB底物經HRP催化顯色,**終止液(2mol/L H?SO?)**終止反應并轉為黃色,450nm測OD值。
二、試劑盒組成
組分 規(guī)格 儲存條件
酶標包 被板96孔/48孔4℃避光
標準品 0.5ml×1瓶-20℃分裝保存
終止液 6ml×1瓶2-8℃
生物素標記抗體 6ml×1瓶4℃避光
顯色劑(A/B液) 各6ml4℃避光
三、樣本處理規(guī)范
血清:全血室溫凝固30min,2000×g離心20min,避免溶血。
血漿:肝素抗凝,1000×g離心30min,去除顆粒物。
細胞裂解液:PBS洗滌后裂解,14000×g離心10min取上清。
四、操作步驟
加樣:標準品/樣本50μL + 生物素抗體100μL,37℃孵育60min。
洗滌:洗板5次,拍干(避免殘留)^^2^^。
顯色:TMB避光孵育15min,終止液50μL/孔,立即測OD值。
五、數(shù)據(jù)分析
標準曲線:四參數(shù)擬合,樣本OD值代入曲線計算濃度。
質控要求:空白孔OD值應<0.1,板內/板間CV<10%。
六、注意事項
終止液安全:含強酸,操作時佩戴防護裝備。
時效性:加入終止液后需30分鐘內檢測,防止吸光度衰減。
干擾因素:避免NaN3、溶血或高脂樣本。
注:以上資料僅供參考,不作為實驗依據(jù),如果其他具體信息請咨詢技術老師或品牌供應商。
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