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　　小鼠短鏈脂肪酸(SCFA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書?

　　(基于試劑盒通用操作流程整理，供參考)

　　?一、試劑盒基本信息?

　　?檢測目標(biāo)?：小鼠糞便、血清或組織樣本中的短鏈脂肪酸(如乙酸、丙酸、丁酸等)。

　　?檢測原理?：基于競爭性ELISA法，通過特異性抗體結(jié)合SCFA，顯色后通過OD值定量。

　　?適用樣本?：血清、糞便懸液、腸道內(nèi)容物或組織勻漿液。

　　?二、試劑盒組成?

　　組分?jǐn)?shù)量保存條件

　　SCFA標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉)1瓶-20℃(溶解后4℃保存)

　　預(yù)包被微孔板96孔4℃

　　酶標(biāo)試劑(HRP)1瓶4℃(避光)

　　顯色液A/B各1瓶4℃(避光)

　　終止液1瓶室溫

　　樣本稀釋液1瓶4℃

　　?三、實(shí)驗(yàn)步驟?

　　?1. 樣本前處理?

　　?糞便/腸道內(nèi)容物?：取50-100mg樣本，加入1mL PBS勻漿，離心(3000rpm，10min)，取上清備用。

　　?血清?：直接使用，避免反復(fù)凍融。

　　?組織?：按1:9比例(重量/體積)加入PBS勻漿，離心后取上清。

　　?2. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?

　　用樣本稀釋液將凍干標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶，梯度稀釋為6個(gè)濃度(如：0、5、10、20、50、100 μmol/L)。

　　?3. 檢測流程?

　　?加樣?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品孔：每孔50μL標(biāo)準(zhǔn)品。

　　樣本孔：每孔50μL待測樣本。

　　空白孔：50μL樣本稀釋液。

　　?加酶標(biāo)試劑?：每孔加入50μL酶標(biāo)試劑(空白孔除外)，37℃孵育30min。

　　?洗板?：甩干液體，每孔加滿洗滌液，靜置30s后棄去，重復(fù)5次。

　　?顯色?：每孔依次加入顯色液A/B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　?終止?：每孔加入50μL終止液，立即測定OD450nm值。

　　?四、數(shù)據(jù)分析?

　　?標(biāo)準(zhǔn)曲線?：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制曲線(推薦四參數(shù)擬合)。

　　?樣本計(jì)算?：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算樣本中SCFA濃度(需乘以稀釋倍數(shù))。

　　?五、注意事項(xiàng)?

　　?關(guān)鍵步驟?：

　　洗板后需拍干，避免殘留液體影響OD值。

　　顯色時(shí)間需嚴(yán)格控制，避免過度反應(yīng)。

　　?樣本要求?：

　　避免使用溶血或脂血樣本。

　　糞便樣本建議新鮮采集或-80℃保存。

　　?試劑保存?：

　　未開封試劑盒-20℃保存，開封后按組分要求保存。

　　?說明?：以上內(nèi)容基于通用ELISA操作整理，具體操作請以試劑盒配套說明書為準(zhǔn)。