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知識解答:ELISA實驗中終止液的重要性
更新時間:2025-08-26瀏覽:72次

  

  ELISA實驗中,?終止液?是確保實驗數(shù)據(jù)準確性和可靠性的關(guān)鍵試劑,其重要性主要體現(xiàn)在以下方面:

  一、終止液的核心作用?

  終止酶促反應(yīng)?

  通過強酸性環(huán)境(如2mol/L H?SO?)破壞HRP酶的活性,立即停止顯色反應(yīng),防止底物(如TMB)過度轉(zhuǎn)化導(dǎo)致信號失真?。

  穩(wěn)定顯色產(chǎn)物?

  將藍色陽離子根(TMB氧化產(chǎn)物)轉(zhuǎn)化為黃色聯(lián)苯醌,并在450nm處形成穩(wěn)定吸收峰,便于酶標儀準確讀取OD值?。

  控制反應(yīng)時間?

  加入終止液后需在30分鐘內(nèi)完成檢測,避免顯色產(chǎn)物分解或顏色衰減導(dǎo)致數(shù)據(jù)偏差?。

  二、終止液對實驗結(jié)果的影響?

  未加終止液的后果?

  反應(yīng)持續(xù)進行會導(dǎo)致:

  OD值隨時間升高,無法準確反映初始濃度差異?。

  不同檢測孔的讀數(shù)因時間差異而不可比?。

  最佳操作規(guī)范?

  每孔添加50μL終止液(標準用量),確保反應(yīng)一致性?。

  三、安全與質(zhì)量控制?

  安全操作?:含強酸成分,需在通風櫥中操作并佩戴防護裝備?。

  質(zhì)控標準?:空白孔OD值應(yīng)<0.1,否則提示試劑污染或操作失誤?。

  四、應(yīng)用場景擴展?

  終止液已納入職業(yè)衛(wèi)生檢測標準(如GBZ 57—2019),用于變應(yīng)原特異性IgE抗體測定?,并在轉(zhuǎn)基因研究(如Bt蛋白檢測)中確保定量準確性?。

  五、注意事項?

  時效性?:加入終止液后需立即檢測,放置超過30分鐘可能導(dǎo)致OD值下降(陽性樣本)或升高(陰性樣本)?。

  儲存條件?:2-8℃避光保存,有效期通常為12個月?。

  通過規(guī)范使用終止液,可顯著提升ELISA實驗的重復(fù)性和數(shù)據(jù)可靠性?。

  注:以上資料僅供參考,不作為實驗依據(jù),如果其他具體信息請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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