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ELISA實驗中標曲和樣本的顯色問題
以下是天津本生ELISA實驗中關(guān)于 ?標曲和樣本顯色問題? 的常見原因及解決方案，綜合多篇文獻分析整理：
一、標曲不顯色或顯色弱，樣本正常
標準品溶解不充分?
溶解時未渦旋震蕩，導(dǎo)致標準品未溶解或稀釋不均。
解決?：使用渦旋震蕩器充分混勻標準品及稀釋液。
孵育條件不當?
靜置孵育導(dǎo)致抗原抗體接觸不充分，建議使用微孔板振蕩器(37℃)。
試劑漏加或失效?
可能漏加檢測抗體、酶標試劑，或試劑因反復(fù)凍融失活。
解決?：分裝保存試劑，操作時標記步驟避免遺漏。
二、標曲和樣本均不顯色
系統(tǒng)性問題?
酶標試劑(如HRP)失活、底物(TMB)污染或過期。
解決?：更換新鮮底物，檢查試劑保存條件(避光、防潮)。
操作失誤?
未按說明書步驟操作(如漏加關(guān)鍵組分)。
解決?：嚴格遵循操作流程，新手建議使用帶染料的試劑盒輔助驗證。
三、標曲顯色正常，樣本不顯色
樣本濃度過低?
目標蛋白濃度低于檢測限，或樣本類型(如血漿、細胞上清)不匹配。
解決?：嘗試高敏ELISA試劑盒或濃縮樣本。
樣本干擾物質(zhì)?
溶血、細菌污染、類風濕因子等導(dǎo)致假陰性。
解決?：離心去除雜質(zhì)，添加蛋白酶抑制劑或稀釋樣本。
四、顯色過強或無梯度
洗滌不凈
殘留HRP酶催化底物過度顯色，尤其是TMB前最后一次洗滌。
解決?：確保洗液注滿孔，拍干液體，手動洗板時更換吸水紙。
底物孵育時間過長?
TMB顯色超過15分鐘可能導(dǎo)致OD值飽和。
解決?：顯色10-15分鐘后及時終止(最高濃度孔出現(xiàn)深藍色即可)。
五、其他注意事項
移液精度?：定期校準移液器，避免加樣誤差。
環(huán)境控制?：避免底物(TMB)提前氧化(如避光保存)。
對照設(shè)置?：陰陽性對照可幫助區(qū)分系統(tǒng)誤差與樣本問題。
通過規(guī)范操作和針對性排查，可顯著改善顯色異常問題。
注：以上資料僅供參考，不作為實驗依據(jù)，具體請咨詢技術(shù)老師或產(chǎn)品品牌供應(yīng)商。
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