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　　細(xì)胞培養(yǎng)基的操作過(guò)程您了解嗎?

　　細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)成長(zhǎng)的養(yǎng)分環(huán)境，是供應(yīng)細(xì)胞養(yǎng)分和促進(jìn)細(xì)胞成長(zhǎng)增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。培育液或培育基的含義簡(jiǎn)直相同，英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時(shí)，傾向性地稱(chēng)為培育基，而將粉劑配成液體后，多稱(chēng)為培育液。培育液中常常補(bǔ)加血清、抗生素等成分。

　　過(guò)程：

　　一、復(fù)蘇

　　1.把凍存管從液氮中取出來(lái)，當(dāng)即投入37℃水浴鍋中，輕微搖晃。液體都融化后(大約1-1.5分鐘)，拿出來(lái)噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。

　　2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培育基的15ml的離心管中(用培育基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來(lái))，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

　　3.把上清液倒掉，加1ml培育基把細(xì)胞懸浮起來(lái)。吸到裝有10ml培育基的10cm培育皿中前后左右輕輕搖晃，使培育皿中的細(xì)胞均勻分布。

　　4.標(biāo)好細(xì)胞品種和日期、培育人姓名等，放到CO2培育箱中培育，細(xì)胞貼壁后換培育基。

　　5.3天換一次培育基。

　　二、傳代

　　1.培育皿中的細(xì)胞覆蓋率到達(dá)80%-90%時(shí)要傳代。

　　2.把原有培育基吸掉。

　　3.加恰當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行)，消化1-2分鐘。

　　4.細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培育基終止消化。

　　5.用移液槍吹打細(xì)胞，把細(xì)胞都懸浮起來(lái)。

　　6.把細(xì)胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

　　7.倒掉上清液，加1-2ml培育基，把細(xì)胞都吹起來(lái)。

　　8.依據(jù)細(xì)胞品種把細(xì)胞傳到幾個(gè)培育皿中。一般，癌細(xì)胞分5個(gè)，正常細(xì)胞傳3個(gè)，繼續(xù)培育。

　　三、凍存

　　把細(xì)胞消化下來(lái)并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來(lái)，分裝到滅菌的凍存管中，中止幾分鐘，寫(xiě)明細(xì)胞品種，凍存日期4℃30min，-20℃30min，-80℃過(guò)夜，然后放到液氮灌中保存。

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